小鼠Smad 酶聯(lián)免疫elisa試劑盒規(guī)格

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產品名稱：小鼠Smad 酶聯(lián)免疫elisa試劑盒規(guī)格
英文名稱： Smad ELISA Kit
規(guī)格：96T/48T
存儲條件：2-8℃
有效期：6個月
特異性:本ELISA檢測試劑盒可同時檢測天然或重組的，且與其他相關蛋白無交叉反應。
檢測種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測試劑盒等種屬。
適用范圍：此試劑盒僅用于科研實驗，禁用于臨床 。

類型和操作步驟
ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑：
①固相的抗原或抗體，
②酶標記的抗原或抗體，
③酶作用的底物。根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。
（一）雙抗體夾心法、
（二）一步法、
（三）間接法測抗體、
（四）競爭法。
標本要求
．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可向客服索取說明書》》 在線索取
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中 先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品0μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鐘。
0. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后5分鐘以內進行。
技術流程:
一、雙抗體夾心法(檢測未知抗原)
、用緩沖液將抗體稀釋至-0ug/ml。在反應孔中加0.ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～小時，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.ml，37℃ 0～30分鐘。
5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則40nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.倍，即為陽性。
二、間接法(檢測未知抗體)
、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至-0ug/ml， 每孔加0.ml，4℃過夜。次日洗滌3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
3、加酶標抗體：于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.ml，37℃ 0～30分鐘。
5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則40nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.倍，即為陽性。

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